適用領域 | 科研 | 產地 | 進口 |
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加工定製 | 是 |
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01
DPO™技術
1、原理介紹
Dual Priming Oligonucleotide(DPO™)是一種新型的多重靶標擴增引物設計方法,可提高靶標檢測特異性,減少非特異性擴增。該技術可用於(yu) “一管多重"檢測,也適用於(yu) 多重實時PCR檢測。
DPO™引物結構不同於(yu) 常規引物,由三部分組成。5’端部分相對較長,是引物退火過程中的穩定序列;3’端部分相對較短,是引物延伸的決(jue) 定序列;中間插入的多聚脫氧ganji(Poly-dI linker),將兩(liang) 端的特異性功能序列連接起來。
在PCR過程中,DPO™引物分為(wei) 兩(liang) 步退火步驟。較長片段的5’端序列Tm值較高,優(you) 先與(yu) 靶標序列結合,穩定DPO™引物與(yu) 靶標退火步驟;繼而較短片段的3’端結合至靶標序列上,啟動特異性延伸;而連接5’和3’端的Poly-dI linker在引物退火過程中,會(hui) 形成泡狀結構,可調節DPO™引物的兩(liang) 步退火過程,確保引物啟動特異性擴增。
2.特點分析
(1)DPO™引物的特殊設計,可阻斷核酸多重反應中非靶標序列的錯誤延伸。在PCR過程中,即使DPO™引物的5’端長片段部分,結合至非靶標序列上,也會(hui) 因為(wei) 3’端無法互補配對而無法延伸擴增;DPO™引物的3’端由於(yu) 片段較短,在退火溫度中,無法單獨結合至非靶標序列上啟動擴增。
(2)DPO™引物的結構特點,使其在較寬的退火溫度範圍內(nei) ,依然能保持良好的擴增特異性,其允許靶標序列在退火溫度差別近10℃的情況下擴增。
(3)DPO™引物的dute結構,可避免形成引物二聚體(ti) 和複雜的二級結構、防止多重靶標引物間的競爭(zheng) ,因此可實現單個(ge) 反應中,多靶標擴增時的等效性和同步性。
(4)綜合以上特點,DPO™技術特別適用於(yu) 單管多重核酸檢測。
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